結核分枝桿菌廣譜脅迫蛋白Rv2624c的功能研究

結核分枝桿菌廣譜脅迫蛋白Rv2624c的功能研究

作者:師大云端圖書館 時間:2015-07-06 分類:開題報告 喜歡:3170
下載WORD版論文WORD版論文下載 下載PDF版論文PDF版論文下載

【摘要】結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,Mtb)是導致結核病的病原菌。全球約有三分之一的人口感染結核分枝桿菌,每年約有兩百萬人死于結核病,因此結核病成為嚴重威脅人類健康的疾病之一。據估計,人類感染結核分枝桿菌后,只有10%的感染能夠轉化為活動性肺結核;在其余90%的感染中,細菌在宿主肺部存留維持代謝休眠狀態而進入潛伏感染期。結核分枝桿菌的潛伏感染在結核病發病機理中起非常重要的作用,但是目前相關的調節機制尚不明確。近年來已有研究證明結核分枝桿菌的廣譜脅迫蛋白(UniversalStressProtein,USP)家族與潛伏感染有關,研究這類家族蛋白的功能,以期為結核分枝桿菌的潛伏感染研究提供一些線索。廣譜脅迫蛋白是一種古老且保守的蛋白家族,當細菌處于環境壓力脅迫情況下,比如營養物質缺乏,缺氧,NO脅迫,生長環境中有重金屬離子等毒性物質存在,熱休克以及DNA損傷等,該家族蛋白參與表達調控,有助于維持細菌在壓力下存活。感染宿主的結核分枝桿菌被巨噬細胞吞噬后逐步形成肉芽腫,此時的結核分枝桿菌恰好就處于氧氣、營養物質缺乏的壓力環境中。結核分枝桿菌包含十個廣譜脅迫蛋白,研究表明其中一個廣譜脅迫蛋白Rv2623是細菌進入慢性感染期必須的蛋白,該蛋白能夠調節結核分枝桿菌在體內和體外的生長,并且這種調節與蛋白結合ATP的功能有關,提示該家族蛋白與結核分枝桿菌的潛伏感染形成具有密切關系。本論文主要針對結核分枝桿菌廣譜脅迫蛋白Rv2624c進行功能研究。首先構建Rv2624c在大腸桿菌(E.coli中的重組表達質粒,將該蛋白在大腸桿菌中進行表達純化,并且用純蛋白免疫新西蘭大白兔制作抗Rv2624c的兔多克隆抗體。通過對Rv2624c純蛋白進行生化活性檢測,證實了Rv2624c具有ATP結合能力但體外單獨存在時不具有ATP酶活性。對該蛋白ATP結合保守區域的氨基酸進行點突變后,突變體的ATP結合能力下降,證明了突變的氨基酸在蛋白對ATP的結合中起關鍵性作用。其次對過表達Rv2624c野生型和突變體的恥垢分枝桿菌進行了繪制生長曲線實驗和斑點生長實驗,結果顯示過表達Rv2624c對恥垢分枝桿菌的體外生長沒有影響。同時,用過表達Rv2624c野生型和突變體的恥垢分枝桿菌侵染巨噬細胞THP1后比較細菌存活率,我們發現Rv2624c過表達的恥垢分枝桿菌的存活率高于對照菌株,且突變體的存活率趨勢與ATP結合能力大小成正比。轉錄組測序分析表明,對差異表達的基因進行KEGGpathway顯著性富集分析,我們發現過表達Rv2624c的恥垢分枝桿菌和對照菌株相比差異最大的通路是精氨酸脯氨酸代謝通路以及色氨酸代謝通路。通過熒光實時定量PCR驗證Rv2624c過表達的恥垢分枝桿菌中這兩條通路的相關基因在轉錄組水平上與對照菌株相比表達量增高。有報道顯示精氨酸是與結核分枝桿菌在壓力環境中生長有關的氨基酸,而色氨酸的合成能夠抑制CD4T細胞介導的對結核分枝桿菌的殺傷作用。因此,我們推測Rv2624c的功能與精氨酸和色氨酸代謝通路有關。我們通過BlastX比對找出這兩條代謝通路的基因在牛分枝桿菌(M.bovis,BCG)中的同功能基因,對過表達Rv2624c的牛分枝桿菌進行熒光定量PCR驗證這些同功能基因的表達量也有增高,提示Rv2624c的功能與精氨酸脯氨酸代謝通路和色氨酸代謝通路有關。綜上所述,本研究證明了Rv2624c具有ATP結合活性,對Rv2624cATP結合保守區域的氨基酸進行突變后蛋白的ATP結合能力下降。Rv2624c及突變體在恥垢分枝桿菌中的過表達均對恥垢分枝桿菌的體外生長沒有影響,而過表達Rv2624c的恥垢分枝桿菌在侵染巨噬細胞THP1后存活率增高。在轉錄組水平上發現導致這種表型的差異基因富集通路是精氨酸脯氨酸代謝通路和色氨酸代謝通路,并通過熒光實時定量PCR證實了該通路中相關基因表達量增高。在過表達Rv2624c的BCG中找到了這些基因的同功能基因,經驗證表達量也增高,提示Rv2624c的功能可能與精氨酸脯氨酸代謝通路和色氨酸代謝通路有關,為結核分枝桿菌USP的研究提供了線索。
【作者】賈瓊;
【導師】王健偉;
【作者基本信息】北京協和醫學院,病原生物學,2014,博士
【關鍵詞】結核分枝桿菌;廣譜脅迫蛋白;Rv2624c;ATP結合能力;

【參考文獻】
[1]聶宗玉.秦西炫音樂藝術初探[D].山東大學,音樂學,2013,碩士.
[2]孫清玉.噴丸處理技術的應用和工藝控制[J].航空工藝技術.1992(04)
[3]吳志敏.石家莊市高校體育資源的開發研究[D].河北師范大學,體育人文社會學,2014,碩士.
[4]張曉莉.抑郁模型大鼠海馬MKP-1表達及DNA甲基化狀態的研究[D].新鄉醫學院,精神病與精神衛生學,2012,碩士.
[5]李運華,王孫安,林廷圻,史維祥.神經網絡離散變結構控制的算法及其應用[J].控制與決策,1994,04:301-305.
[6]范海燕.《赫索格》中猶太裔的身份建構[D].安徽大學,英語語言文學,2013,碩士.
[7]朱涵鉑.海洋巨災保險的可保原理與投保制度研究[D].大連海事大學,海商法,2014,碩士.
[8]韓廣軒,周廣勝,許振柱.中國農田生態系統土壤呼吸作用研究與展望[J].植物生態學報,2008,03:719-733.
[9]張偉鋒.前路椎間盤切除減壓融合術治療脊髓型頸椎病的臨床研究[D].蘭州大學,外科學(專有學位),2014,碩士.
[10]王曉曄,李少遠.神經網絡自學習模糊控制及其在合成氨生產中的應用[J].控制與決策,1999,S1:613-616.
[11]沈芬.企業CRM系統的專用性需求研究[D].蘇州大學,紡織工程(專業學位),2013,碩士.
[12]佟威.Ge-S基硫鹵玻璃紅外光纖材料的組成、結構與性能研究[D].武漢理工大學,材料學,2004,碩士.
[13]葛靜.移動集團客戶服務運營平臺的分析與設計[D].廈門大學,軟件工程,2014,碩士.
[14]程厚德,李春.善治視野下的國外低碳城市發展經驗及啟示[J].中國行政管理,2014,11:32-35.
[15]陳正宇.生物質成型工藝參數研究[D].機械科學研究總院,材料加工工程,2013,碩士.
[16]王君,周興元.子波相位校正及效果分析[J].石油地球物理勘探,2008,S2:142-145+178+2+1.
[17]要元媛.山西毛榛群落生態學特征研究[D].山西師范大學,生態學,2014,碩士.
[18]馮楠.回收碳纖維增強尼龍6復合材料的制備及性能研究[D].北京化工大學,材料科學與工程,2013,碩士.
[19]王路.中國廉租住房保障法律制度研究[D].南京師范大學,憲法學與行政法學,2012,碩士.
[20]宋攀.劉瓦利教授治療濕疹療效觀察[D].北京中醫藥大學,中醫學,2013,碩士.
[21]楊良.若干碳團簇固體的理論研究[D].中國科學技術大學,凝聚態物理,2014,博士.
[22]錢斌,石東源,謝平平,朱林.電動公交車換電站—電池充電站優化規劃[J].電力系統自動化,2014,02:64-69+84.
[23]劉連升,胡建平.用人機交互技術實現廣義f-k濾波[J].石油地球物理勘探,1994,S2:177-179+238.
[24]劉凱政.我國城市基層社會管理創新研究[D].青島大學,行政管理,2013,碩士.
[25]張艷.社會保障水平對居民生活質量的影響及評價研究[D].上海工程技術大學,社會保障,2010,碩士.
[26]許攀.太陽能與廢熱結合的漁船用海水淡化裝置研究[D].浙江海洋學院,農業機械化(專業學位),2014,碩士.
[27]侯文娟.魏晉南北朝肖像畫研究[D].山西師范大學,美術學,2013,碩士.
[28]張建.基于Web的人力資源管理系統的設計與實現[D].吉林大學,軟件工程,2012,碩士.
[29]歐陽華.基于供應鏈采購的二十二冶海外事業部供應商管理研究[D].燕山大學,物流工程,2012,碩士.
[30]郭福濤,胡海清,金森,馬志海,張揚.基于負二項和零膨脹負二項回歸模型的大興安嶺地區雷擊火與氣象因素的關系[J].植物生態學報,2010,05:571-577.
[31]姜勇.時差法超聲波流量計設計與研發[D].浙江大學,2006.
[32]王曉娟.基于多傳感器信息的移動機器人定位研究[D].浙江大學,2010.
[33]歐陽高翔,倪茂林,孫承啟.基于依參數分離算子的魯棒可靠濾波器設計[J].自動化學報,2008,03:225-232.
[34]雷浩.高容量鎳氫電池正極合成與性能研究[D].北京有色金屬研究總院,材料科學與工程,2014,碩士.
[35]崔晟.山西省專利產出與區域經濟增長關系的實證研究[D].中北大學,技術經濟及管理,2014,碩士.
[36]劉淑芳.農村小學安全教育存在問題及解決策略研究[D].河北師范大學,教育管理,2012,碩士.
[37]陸文凱.基于離散余弦變換的地震隨機噪聲壓制技術[J].石油地球物理勘探,2011,02:202-206+157.
[38]馮勤,武震.eCRM的發展與研究[J].天津成人高等學校聯合學報,2005,05:23-25.
[39]張增營.往復式壓縮機環狀閥工作過程沖擊應力分析[D].廣西大學,化工過程機械,2004,碩士.
[40]馬風華.實物期權理論在R&D項目評估中的應用[D].青島大學,金融學,2004,碩士.
[41]杜娟.論破產重整程序中待履行合同的處理[D].中國政法大學,法律(專業學位),2013,碩士.
[42]劉達新.基于三維CAD的智能三坐標測量機檢測規劃系統的研究與開發[D].合肥工業大學,2009.
[43]康凱.基于GIS的小流域綜合治理輔助信息系統的研究與實現[D].西安電子科技大學,計算機應用技術,2011,碩士.
[44]歐陽青.德陽高科技園區發展戰略研究[D].西南交通大學,工商管理,2003,碩士.
[45]姜珂.禽呼腸孤病毒誘導細胞自噬的機制及其與病毒復制的關系[D].揚州大學,預防獸醫學,2012,碩士.
[46]孟祥岸.我國貨幣政策中間目標選擇問題研究[D].吉林大學,金融,2014,碩士.
[47]黃達.水在g-C_3N_4表面吸附及催化反應的理論研究[D].哈爾濱工業大學,2013.
[48]陳曉冰.室溫固化聚硅氧烷漆膜的制備、結構與性能[D].復旦大學,材料物理與化學,2012,碩士.
[49]陸李超,賈青,成卓韋,劉威,卜巖楓.真菌降解揮發性有機化合物的研究進展[J].環境污染與防治,2014,08:78-83.
[50]李培謙.基于頻譜和小波分析的燒結風機故障診斷研究[D].遼寧科技大學,機械電子工程,2012,碩士.

相關推薦
更多

福彩3d走势综合版 福彩3d出号走势图彩吧网 000432股票行情 淘宝快3 贵州快三开奖结果等 台湾麻将怎么玩 征途官网怎么赚钱 福彩3d坐标连线走势图 南国七星彩票论坛图规 广西快乐十分最新开奖结果查询 看点头条如何赚钱 亿客隆登录 游戏可以开挂赚钱方法 广东十一选五 广东快乐十分开奖走势图 18选7一百期基本走势图 新时时彩趋势